层析用聚酰胺树脂
层析用聚酰胺树脂使用说明书
1. 产品介绍
1.1技术指标:
分 子 量:14000~17000
比表面积:5~10m2/g
PH 值:6~7
溶 解 度:溶于浓盐酸,甲酸,微溶于醋酸,苯酚等溶剂,不溶于水,甲醇,乙醇,丙酮,乙醚,氯仿和苯等常用有机溶剂,对碱较稳定,对酸的稳定性较差,尤其是无机酸,在温度高时更敏感。
1.2 主要用途:
聚酰胺特别适用于多元酚类化合物的分离,如黄酮、醌类、酚酸、含羰基化合物、羧基化合物等。由于其对鞣质吸附强,也可用于将植物粗提物中的鞣质除去。
2. 使用说明书
2.1 树脂性能简介:
聚酰胺是由酰胺键聚合形成的高分子化合物。其酰胺基可与羟基酚类,酸类,醌类,硝基等化合物以氢键形成结合而被吸附 ,其脂肪长链可作为分配层析的载体。聚酰胺在含水系统中层析时,聚酰胺作为非极性固定相,其层析行为反向柱层析;在非水溶剂系统时,聚酰胺作为分配层析的载体,其层析行为为正向柱层析。
2.2 预处理:
取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡,不断搅拌,除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱,洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。再依次用2-2.5倍体积5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱,最后用蒸馏水洗脱至pH中性,备用。
2.3:使用方法:
1、装柱:一般将颗粒状聚酰胺混悬于水中,使其充分膨胀,然后装柱,让聚酰胺自由沉降;当用非极性溶剂系统时候,则用组分中低级性的溶剂装柱。
2、稀释适当浓度上样:一般每100ml聚酰胺上样1.5-2.5g,样品先用洗脱溶剂溶解,浓度为20%-30%。水溶性化合物直接上样;若提取物水溶性不好,则用挥发性有机溶媒溶解、拌适量聚酰胺、挥干或减压蒸干、干法装入柱顶。
3、水洗:先用水洗脱。
4、醇洗:在水中递增乙醇浓度至浓乙醇溶液,或氯仿、氯仿-甲醇,递增甲醇至纯甲醇洗脱。若仍有物质未被洗脱,可用稀氨水或稀甲酰胺溶液洗脱,分段收集。
5、找到最佳吸附比:先小量试验找到最佳吸附比。
6、放大:根据小试及最佳吸附比进行放大试验。
7、聚酰胺的回收:使用过的聚酰胺一般用5%氢氧化钠溶液洗涤,然后水洗,再用10%醋酸液洗,然后用蒸馏水洗至中性,即可。
2.4 再生:
一般用5%NaOH水溶液洗脱,洗至NaOH水溶液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺有不可逆吸附,用NaOH水溶液很难洗脱,可用5%NaOH在柱中浸泡,每天将柱中的NaOH水溶液放出一次,并加入新的5%NaOH水溶液,这样浸泡一周后,鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9,再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱,最后蒸馏水洗脱至pH中性,重复使用。
2.5低分子杂质的去除方法:
1.装柱前先过筛
2.装柱时用5%甲醇或10%盐酸预先除去小分子杂质
3. 应用举例
3.1黄酮类化合物的分离:
由于黄酮类化合物具有两个以上芳香核,且大多数化合物具有游离酚烃基,因此能够吸附在聚酰胺柱上。由于苷元的吸附能力比苷强,一般苷在水或稀醇液洗脱时即可洗下,而苷元则需较浓的醇液才能洗脱下来。
3.2酸类及酚类化合物的分离:
聚酰胺对脂肪族一元酸的吸附力较小,而对芳香族酸类及脂肪族多元酸的吸附能力较大,分离效果较好。酚类物质用聚酰胺层析分离效果更好。
3.3 鞣质的分离和去除
鞣质是一类多酚性物质,很容易吸附在聚酰胺树脂柱上。低分子鞣质的吸附是可逆的,可采用适当的溶剂洗脱而得到分离。高分子鞣质的吸附是不可逆的,吸附后很难洗脱。而无论低分子或高分子鞣质,它们与聚酰胺的吸附比其它的化合物都要强,因此可用聚酰胺去除鞣质。
聚酰胺柱层析法在天然产物的提取分离中发挥了较大的作用。但在实际应用中,常常存在流速较慢和混入低分子杂质(酰胺的低聚物等)的问题。通常情况下,流速问题可以通过预先过筛除去细粉或与硅藻土混合制粒予以克服;而低分子物质的干扰,可在装柱时用5%甲醇或10%盐酸预洗除去。